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菌種保存過程的常見問題有哪些?

瀏覽次數: 日期:2022年5月10日 17:34
分離純化后才能獲得單一菌株,單一菌株進行菌種保藏才有意義,防止菌種交叉污染和變異,這也是菌種保存的基本原則。菌種保存過程中常見的問題有哪些?我們一起來看看!
1、菌種保存管能保存霉菌及酵母菌嗎?
答:可以。對于霉菌等真菌需培養7 天進行保存,而酵母菌需培養三天將孢子洗脫下來進行保存,保存管中的小瓷珠可以作為介質來吸附孢子和菌絲,相當于砂土保存法中砂土作為載體起到的作用。
2、所有的菌都能保存嗎?如果不是的話,什么樣的菌可以保存?什么樣的菌不可以保存?
答:可以。菌種保存的原理是預防或減緩DNA 復制時自發突變導致菌種退化,因此要創造代謝不活潑的狀態,而菌種保存時使菌種進入休眠態(孢子、芽孢),并創造干燥、低溫、缺氧、缺營養的環境,創造的環境越接近此狀態,所保存的菌種的時間就越長,所以從原理上講,所有菌種都可用這種方法保存, 但需要注意的是,苛刻菌(如流感嗜血桿菌、腦膜炎萘瑟氏菌)等特殊細菌保存時,需-80℃或更低溫度保存,才可以做到更長期的保存。
3、能用菌種保存管永久保存菌株嗎?
答:溫度越低,保藏效果越好。從目前的試驗數據及實際保存效果來看,-20℃可保存1-5 年,-80℃或液氮中可保存5-10 年,不同菌種及不同的保存溫度保存時間會有所不同(例如:大腸、沙門等常規細菌-20℃我們目前可以保存到6年)。但需要注意的是所保存的菌種需每年抽檢進行生化特征的鑒定,確定菌株無變異。
4、菌株保存的是第三代,-80℃保存,再取出來活化的話屬于第幾代?
答:保存的是第三代復活出來后,如果采用平板或肉湯活化相當于轉接了一代,就是第四代了,如果還在瓷珠里的話就還是原來的代數。如果是保存在斜面上,這一支斜面一直就是第三代,如果轉接到另一支斜面就是第四代了。傳代原則,菌株活化復蘇不論以任何形式繁殖了一次就算是傳了一代。但如果僅是物理位置的轉移沒有繁殖就不是傳代,需要注意。
5、剛買回來的陽性菌株是第0代嗎?
答:一般菌株你買回來的時候上面都會寫明第幾代,常規來說都是第0代的。像購買的ATCC或CICC的凍干粉都是標記為0代的。
6、菌株傳代保存到瓷珠里一定要挑單菌落嗎?
答:不一定非挑單菌落,但是一定要挑相同特征的菌落,就是說從同一個菌落純化出來的,以保證它們的特性完全一致。原則是盡量多挑,寧多勿少。 
7、怎樣延長菌株的保存時間呢?
大量的實驗證明菌株在低溫、干燥、缺氧、缺營養的條件下保存效果是最好的,越接近這種保存條件,菌株的保存時間越長。
8、怎樣純化菌株?
純化就是從TSA上或別的非選擇性平板上轉接一次,這就相當于純化了。
9、我們保存的一代菌株是不是要重新傳代保存呢,認證老師會不會認為這是個錯誤?
答:應該不會,認證老師不會提出這種問題的,不過最好是一代菌株保存一些、二代菌株保存一些,使用時工作菌株最好使用第三代菌株,一代菌株可作為長期保存用。
10、為何要將第三代作為工作菌株?
答:多傳代幾次后菌株的活力會明顯提高,但最多傳代到第五代后就不能用了,因為第五代后菌株雖然不會完全變異,但變異率會明顯增加,因此選用第三代作為工作菌株是比較合適的,若使用第一、第二代菌株活力沒有那么強。
11、用瓷珠管反復上下搖勻,有泡沫不容易吸出來,怎么辦?
答:不必特別劇烈大尺度的搖動瓷珠管,稍微上下晃動就可以;如果確實有泡沫的話可以靜置一會,讓菌株多吸附一下瓷珠也是可以的。
12、TSA斜面一般多少度保存,可以放在冷藏里嗎?
答:2-8℃保存,放在冷藏是可以的;注意弧菌和綠膿桿菌要放到室溫20-25℃保存,否則會很快死亡。
13、如果TSA斜面放在冷凍里面,會有什么影響?
答:瓊脂冷凍后性狀會發生改變,會變得很軟,結構發生改變,所以不建議冷凍;如果要冷凍的話就采用甘油保存法或瓷珠保存法。
14、用瓷珠管保存產氣莢膜梭菌老是保存不好!做好瓷珠管之后瓷珠管要放到厭氧袋里面再放到-20℃么?
答:如果冷凍保存最好放在厭氧袋里再-20°保存,保存效果還可以;或者可以采用庖肉培養基保存,它是一種液體培養基,將產氣莢膜梭菌接進去然后2-8 ℃保存,可以保存一年沒有問題,在厭氧環境下保存效果最好。
15、菌種保藏時為什么要進行分離純化?
答:分離純化后才能獲得單一菌株,單一菌株進行菌種保藏才有意義,防止菌種交叉污染和變異,這也是菌種保存的基本原則。
16、菌種保存管對于平板來說,對挑選菌落個數有要求嗎?還是將整個平板的菌落全部刮入管中?
答:對于要保存的細菌一般是要進行2-3 次的純化,要保證一個平板上的菌是由單一菌落傳代而來的,所以在細菌保存的過程中,為了保證制備的菌懸液可以達到3-4MCF,是可以將整個平板的的細菌全部刮到管中的,如果平板長的比較滿一般半個平板就夠用,具體用量也根據菌種的不同有所差異,如霉菌、酵母菌在保存時,不適合用濁度法。

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該資訊的關鍵詞為:菌種  保存 

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